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林木种子检验规程 发芽测定(GB 2772-1999)

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林木种子检验规程 GB 2772-1999 → 发芽测定

5 发芽测定

5.1 目的

在室内标准条件下测定种批的最大发芽潜力,使测定结果能在最接近于随机样本变异的范围内重现,据此比较不同种批的品质并估计田间播种价值。

5.2 定义

5.2.1 发芽

室内测定-粒种子发芽,是指幼苗出现并生长到某个阶段,其基本结构的状况表明它是否能在正常的田间条件下进一步长成一株合格苗木。

5.2.2 发芽率

质量检验证书上填报的发芽率,是在附录B表B1规定的条件下及其规定的期限内生成正常幼苗的种子粒数占供检种子总数的百分比。

5.2.3 幼苗基本结构

对于幼苗继续生长成为合格苗木必不可少的结构。随所检树种而不同,组成幼苗的是以下某些基本结构的特定组合:根系、胚轴.子叶、初生叶、顶芽以及禾本科、棕榈科的芽鞘。

5.2.4 正常幼苗

表现出具有潜力,能在土质良好,水分、温度、光照适宜的条件下继续生长成为合格苗木的幼苗。符合下列类型之--的可以划为正常幼苗:

⒜ 完整幼苗:该树种应有的基本结构全都完整、匀称、健康,生长良好;

⒝ 带轻微缺陷的幼苗:该树种应有的基本结构出现某些轻微缺陷的幼苗,但其他方面正常,生长均衡,与同次测定中完整幼苗的其他方面不相上下;

⒞ 受到次生性感染的幼苗:显然本该属于上述a)类或b)类但受真菌或细菌感染的幼苗,条件是该粒种子不是感染源。

5.2.5 不正常 幼苗

表现出没有潜力,在土质良好,水分、温度、光照适宜的条件下不能长成合格苗木的幼苗。不正常幼苗有三种类型:

⒜ 损伤苗:任何基本结构缺失,或损伤严重无法恢复正常,不能指望均衡生长的幼苗;

⒝ 畸形苗或不匀称苗:生长孱弱或生理紊乱,或基本结构畸形或失衡的幼苗;

⒞ 腐坏苗:由于原发性感染(即该粒种子就是感染源),该树种的任何基本结构染病或腐坏,停止正常生长的幼苗。

例如,具有下列情况之一的幼苗为不正常幼苗:

⒜ 初生根:生长停滞、粗短、缺失、断折、自顶端开裂、缢缩、纤细、束缚在种皮中、呈负向地性、玻璃状、因原发性感染而腐坏、禾木科植物种子无种子根或仅有一条孱弱的种子根;

⒝ 下胚轴、上胚轴和中胚轴:粗短、深度横裂或断折、完全纵裂、缺失、缢缩、极度扭曲、弯曲向下、呈环状或螺旋状、纤细、玻璃状、因原发性感染而腐坏;

⒞ 子叶(下述缺陷所占面积超过子叶面积的一半者为不正常,只占一半或不足一半者为正常,称为“50%规则"。但只要损伤或腐坏出现在子叶同幼苗中轴的联结点上或者基尖附近,该幼苗就属于不正常幼苗,在这种情况下不考虑50%规则.):肿胀或卷曲、畸形、断折或有其他损伤、断离或缺失、变色、坏死、玻璃状、因原发性感染而腐坏;

⒟ 初生叶:畸形、损伤、缺失、变色、坏死、外形正常但小于正常大小的四分之一.因原发性感染而腐坏;

⒠ 顶芽及其周围的组织:畸形、损伤、缺失、因原发性感染而腐坏(如果顶芽有缺陷或者缺失,即使已经生出一个或两个侧芽,该幼苗仍为不正常幼苗);

⒡ 芽鞘和第一片叶(禾本科、棕榈科)

芽鞘:畸形损伤、缺失、顶端损伤或缺失、极度向下弯曲、呈环状或螺旋状、严重扭曲,从顶端向下开裂长度超过全长的三分之- ,基部开裂或有其他损伤。

第一片叶:伸展长度不及芽鞘的一半、缺失、撕裂或呈其他畸形;

⒢ 幼苗整体:畸形、断裂、子叶先出、二苗融合、胚乳环圈不落、黄化或白化、纤细、玻璃状、因原发性感染而腐坏。

5.2.6 多苗种子单位

能够产生多株幼苗的种子单位。有以下几种类型:

⒜ 种子单位内含的真种子多于一粒,例如柚木(Tectona grandis) 的坚果和楝树(Melia aredarach)的核果;

⒝ 真种子内含的胚多于一枚。有些种这是正常现象(多胚现象),有些种则是偶尔出现(李生现象)。如果是孪生胚,通常是其中一株幼苗弱小纤细,但偶尔也会是两株幼苗都接近正常大小;

⒞ 融合胚:偶尔会从一粒种子中生出两株融合在一起的幼苗。

5.2.7 未萌发粒

在附录B表B1给定的测定条件下测定期结束时仍未发芽的种子。可以区分成几个类型:

⒜ 硬粒:在测定条件下未能吸水而在测定期末仍然坚硬的种子。-种休眠形态,常见于豆科,也能出现于其他某些科;

⒝ 新鲜粒:在测定条件下能够吸水但发芽进程受阻,外形依旧良好,坚实硬朗,仍然具有生出正常幼苗潜力的种子;

⒞ 死亡粒:测定期末既非硬粒,又非新鲜粒,又未萌出幼苗任何结构的种子,通常包被物极软、变色、发霉且毫无生出幼苗的征兆;

⒟ 其他类型:根据送检单位的要求,未萌发粒还可细分为以下几类,它们在测定样品中所占的百分数可填入质量检验证书的备注栏:

  • 空粒-完全空瘪或仅含某种残遗组织的种子;
  • 涩粒-杉木、柳杉胚珠受精后败育,内含物为紫黑色单宁类物质的种子;
  • 无胚粒-种子内有新鲜胚乳或配子体组织,但其中既无胚腔,也没有胚;
  • 虫害粒-内有 昆虫的幼虫或虫粪或有其他迹象表明受到过昆虫侵害,影响发芽能力的种子。

5.3 发芽床

5.3.1 纸床

用作发芽床的紙虚是疏松、通气、无毒、无菌、容易向神子不断提供水分的徳紙或其他尖型的紙,或者是洁浄无毒的紗布、脱脂棉.神子排放在床面。カ了向神子提供足移的水分,可以用多屋的紙。也可以在纸下加塾纱布或脱脂棉。作床材料的pH値应在6. 0~7.5范国内。

发芽测定用纸应在干燥凉爽的室内存放并透当包装,避免污损破伤,必要吋使用前座当天菌,消除存放期中可能感染的霉菌.

5.3.2 沙床

作床的沙应当顆粒均匀一致,能通过直径为0.8 mm的筛孔,而截留在孔眼直径カ0. 05 mm的筛子上.沙必须无菌无毒,不含任何种子。沙的pH値座在6.0~7.5范国内。沙不能重复使用。

5.3.3 土床

只有在紙床、沙床上发芽的幼苗出现植物毒性症状,或者対纸床上的幼苗的鉴定发生怀疑吋,オ可以使用貭地疏松、結枸良好、不会板結的壞土作床,使用吋不能挤压。貭地紧密的土壌应适当混加蛭石或沙。土中不能混有任何种子.土的pH值应在6.0~7.5之间。土不能重复使用。

5.4 发芽设备

5.4.1 发芽盒

用于纸床的带盖的、内具有孔隔板的透明发芽容器。盒的长度和宽度应能容纳四次或至少两次重复的种粒。盒商应略大于受检树种正常幼苗的高度。发芽床铺放在具有孔眼的隔板上。隔板同盒底之间的空间用于存水,使盒内的相对湿度尽可能接近100%。

5.4.2 直立板发芽盒

有机玻璃制成的长方形盒盒商约20 cm.盒内可以垂直嵌入若于块中心距约2 cm的有机玻板。在玻板顶边之下适当距离处播放.-排种子并覆以同玻板等大的湿滤纸。滤纸下端浸人盒底的水中向种子供水。改变滤纸下端入水的深度可以控制供水量。盖上盒盖可以保持盒内空气湿度。从玻板的反面可以清晰地观察种子的发芽状况。

5.4.3 带有水箱的发芽装置

主体是镀锌钢板或不锈钢板制作的水箱,水箱顶板上排放钟形发芽皿。钟形发芽皿的芯带穿过顶板上的孔眼或窄缝伸人水箱吸水。水温由控温器控制,为发芽环境提供所需的温度。水箱上方悬放冷白荧光灯管。

5.4.4发芽箱 

能调控温度、湿度和光照的密闭箱体。好的发芽箱应当具有加热和降温两个系统,隔热性能良好,能提供发芽所需的光照条件,且能控制湿度,能使箱内的相对湿度接近100%.箱内的隔板承放纸床,直接排放供检样品。隔板的间距应使同一时间里能够测定尽可能多的样品。不能控制湿度的温箱应当使用5.4.1描述的发芽盒或5.4.2描述的直立板发芽盒盛放供检样品。

5.4.5 发芽室

能调控温度并有光照设备、专供发芽测定使用的房间。整个发芽窒的湿度较难控制,一般用发芽盒或直立板发芽盒向种子提供水分并保持发芽小环境的湿度。

5.5 测定程序

5.5.1 提取测定样品

测定样品从净度分析所得的、经过充分混拌的纯净种子中按照随机原则提取。可以用四分法将纯净种子区分成4份,从每份中随机数取25粒组成100粒,共取4个100粒,即为4次重复。也可以用数粒器提取4次重复。种粒大的,或者怀疑种子带有病菌的,可以将100粒的每个重复以50粒或25粒为一组,以组为单位在发芽床上排放,由这样的2个组或4个组组成1次重复,使种粒之间有足够的距离。

无论是人工数取还是用数粒器提取样品,都必须避免有意识或无意识地对种子作任何选择。

附录B表B1规定采用称量发芽测定法的树种,或因种粒特小决定采用称量发芽测定法的其他树种,用符合第3章规定的程序从送检样品中提取测定样品,共取4个重复。每个重复的重量见附录B表B1。

5.5.2 测定样品的预处理

对测定样品作预处理的目的是解除休眠。预处理的方法已分树种列在附录B表B1的备注栏。也可以采用其他有效的预处理方法,但必须在质量检验证书中注明。如果不能肯定某种预处理方法是否有效,可以在5.5.1规定的4个重复之外,再取4个重复作另一份测定样品,或再取8个重复作为另外两份测定样品,用不同的方法作预处理,同时作发芽测定,以其中最好的结果作为该次测定的结果填报,并注明所用的预处理方法。

附录B表B1所列的测定时间不包括预处理时间。带翅的种子可以去翅,但不能伤及种子。.

5.5.3 置床和管理,

5.5.3.1 种粒在发芽床 上应保持一定距离,避免病茵蔓延、根系缠绕,也便于点数。

5.5.3.2 采用沙床(土床)时 ,需光种子压人沙(土)的表层,忌光种子播在疏松而平整的沙(土)之上,再均匀疏松地加盖厚度为10~20 mm的沙(土)。

5.5.3.3 发芽容器和直立板发芽盒中的直立板应当编号.特别是要由几个容器或几块直立板组成一次重复的,必须在置床时通过编号确定由哪几个容器或哪几块板组成哪一次重复,绝不允许为了通过误差检验而任意组合。

5.5.3.4 经常检查测定样品及其水分、通气、温度.光照条件。检查的间隔时间由检验机构根据树种特性和样品状况等自行确定。轻微发霉的种粒可以拣出用清水冲洗后放回原发芽床。发霉种粒较多的要及时更换发芽床或发芽容器。

5.5.4 测定条件

5.5.4.1 水

发芽床的用水不应含有杂质。水的pH值应在6.0~7.5之间。如果当地的水质不符合要求,可以使用蒸馏水或去离子水。

发芽床应始终保持湿润,不断地向种子提供所需的水分。但供水过量也会影响种子的通气。对种子的供水量取决于受检树种的特性、发芽床的性质以及发芽盒的种类(5.4.1.5.4.2和5.4.3),由检验机构根据经验确定.各重复间的供水量应当一致。

5.5.4.2 通气

置床的种子要保持通气良好,但不能使发芽床过度失水而影响萌发。

5.5.4.3 温度

附录B表B1所列的温度是指发芽床上种子所处水平层次的温度,因设备性能而产生的温度变化不能超过士1C.为发芽种子提供光照时不能使温度发生波动。

附录B表Bl列出帶有幅度的温度指的是变温,每24h内应有16 h保持较低的那个温度,其余8h保持较高的那个温度。温度的转换最好在3h内逐渐完成,休眠性种子可以在1h内完成。周末或节假日不能按要求转换温度时,应使发芽环境保持在较低的那个温度水平上。

附录B表B1中有的树种列有几种温度,它们的排列顺序并不表示其优劣,可以根据检验工作的方便选用。质量检验证书中应当注明实际采用的温度。

5.5.4.4 光

除非确已证实某个树种的发芽会受到光抑制,否则发芽测定中的每个24h都应当给予8h的光照,使幼苗长势良好,不容易遭受微生物侵害,也便于评定。施加的光指的是不含或极少含远红光的冷白色荧光。提供的光应均匀- .致地使种子表面接受750~1 250 lx的照度。对于变温发芽的树种,是在给予高温的那个8h内提供光照。

5.5.5 测定的持续时间

5.5.5.1 各树种发芽测定的持续时间在附录B表B1中以末次记数的天数表示,自置床之日起算,不包括预处理的时间。

5.5.5.2 如果测定 样品在规定时间里发芽的种粒不多,可以适当延长测定时间。延长的时间最多不应超过规定时间的二分之一。如果在规定的结束时间之前样品已经充分发芽,且后期连续三天每天的发芽粒数不超过各重复供试种子粒数的1% ,则该次测定可以提前结束。无论是延长还是提前结束,测定的实际天数应在质量检验证书中注明。

附录B表B1中有些树种列有几种可供选择的温度。如果选用的是较低的温度,初次计数可以适当推迟。如果使用的是沙床且测定持续时间不足10天,也可以不作初次计数。初次计数是使检验人员对供检样品的质量状况可以较早地作出估计,所记数值并不要求填报。

5.5.5.3 中期计数的次数由检验机构自行确定,除有特殊要求外,通常不宜过多,尽量减少对尚未充分生长的幼苗造成伤害。

5.5.6 观察、评定和记载

5.5.6.1 发芽测定的情况要定期观察记载.观察记载的间隔时间由检验机构根据树种和样品情况自行确定,但初次计数(除5.5.3.2所述的沙床以外)和末次计数必须有记载。

5.5.6.2 生长到一定阶段,必要 的基本结构都已展现的每株幼苗都必须根据5.2.4和5.2.5进行评定,并在记数后从发芽床上拣出。严重腐坏的幼苗也应拣出,以免造成次生性感染。呈现其他缺陷的不正常幼苗则应保留在发芽床上直至末次计数。拣出的幼苗数同发芽床上剩余的种粒数应当等于前一次记载时的剩余种粒数。拣出幼苗时要防止影响正在发芽生长的幼苗。

5.5.6.3 一个多苗种子单位常 能生出两株或几株幼苗,无论其中有几株符合5.2.4的定义,都记为一株正常幼苗。根据要求,也可以统计并填报100个多苗种子单位生出的正常幼苗总数,或者分别统计并填报生出了一株、两株或更多正常幼苗的多苗种子数。

5.5.6.4 测定结束时根据 5.2.7给出的定义区分未发芽粒。新鲜粒的鉴定可以采用四唑染色法、切开法、离体胚发芽法或X射线衬比法.无法判定是新鲜粒还是死亡粒的一律记为死亡粒。已经生出了幼苗的某些部位(例如根尖),即使在评定时确已腐坏,也不记为死亡种子而记为不正常幼苗。根据要求需要对属于5.2. 7d)的未发芽粒分类记数时,可以采用以下方法:

⒜ 发芽测定之前:

  • 测定样品的各个重复先作X射线检验;
  • 另取四份重复用切开法检验。

⒝ 发芽测定之后:

  • 切开法;
  • 四唑染色法或靛蓝染色法。

5.6 测定结果的计算

5.6.1 发芽测定結束吋按5.2.2 计算发芽率,同肘按5.2.5廾算不正常幼苗以及按5.2.7中a)、b)、c)计算硬粒、新鮮粒和死亡粒的百分数。根据要求,逐可以計算空粒、涩粒、无胚粒和虫害粒(5.2.7.d))的百分数。

5.6.2 5.6.1 所列的各种百分数乃是100粒种子4个重复的平均数。以50粒カ一組的,应在计算前按原編号(見5.5.3.3)組合成4个重夏.计算結果按GB/T 8170修約至整数.正常幼苗百分数、不正常幼苗百分数和未发芽粒百分数之和必須等于100.

5.6.3 按表5.1 橙査重夏同友芽百分数的差昇是否カ随机俣差.如果各重隻岌芽百分数的最大値同最:

小值的差距没有超辻表5的容午范國,就用各重夏发芽百分率的平均数作カ垓次測定的发芽率.

表5 发芽测定容许差距

平均发芽百分率 最大容许差距
1 2 3
99
98
97
96
95
93~94
91~92
89~90
87~88
84~86
81~83
78~80
73~77
67~72
56~66
51~55
2
3
4
5
6
7~8
9~10
11~12
13~14
15~17
18~20
21~23
24~28
29~34
35~45
46~50
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20

5.6.4 称量发芽测定法的测定结果用单位重量样品中的正常幼苗数表示,单位为株/克。计算时,利用表6检查重复间的差异是否为随机误差。先计算4个重复正常幼苗的总数,在表6第1栏找出该总数所在范围,并在第2栏中查到最大容许差距。如果4个重复中正常幼苗数的最大值和最小值之差等于或小于最大容许差距,该次测定可靠,以4个重复单位重量的正常幼苗数的平均数作为测定结果填报。

表6 称量发芽测定容许差距

供检样品总重量中
的正常发芽粒数
最大容许差距 供检样品总重量中
的正常发芽粒数
最大容许差距
1 2 1 2
0~6
7~10
11~14
15~18
19~22
23~26
27~30
31~38
39~50
51~56
57~62
63~70
71~82
83~90
91~102
103~112
113~122
123~134
135~146
147~160
4
6
8
9
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26

161~174
175~188
189~202
203~216
217~230
231~244
245~256
257~270
271~288
289~302
303~321
322~338
339~358
359~378
379~402
403~420
421~438
439~460
>460

27
28
29
30
31
32
33
34
35
36
37
38
39
40
41
42
43
44
45

5.7 重新测定

有下列情况之一时应重新布置测定。重新测定仍按5.6的规定计算结果并检查误差。

⒜ 怀疑是休眠干扰测定结果时,可以仍按附录B表B1的发芽条件,但选用一种或几种解除休眠的

方法重新布置一次或同时布置几次测定,将其中最好的结果作为测定结果填报,并注明所用方法。

⒝ 由于病毒或真菌、细菌蔓延干扰测定结果时,可以使用沙床或土床重新布置-次或同时布置几.

次测定。必要时还可加大种粒间的距离。将所得的最好结果作为测定结果填报,并注明所用方法。

⒞ 难于评定的幼苗数量较多而千扰测定结果时,可以仍按附录B表B1的发芽条件,用沙床或土床.

重新布置一次或同时布置几次测定。将所得的最好结果作为测定结果填报,并注明所用方法。

⒟ 由于测定条件、幼苗评定或计数显然有误时,应当按原用方法重新测定,并填报重新测定的结

果。

⒠ 由于其他不明因素使得各重复间的最大差距超过表5规定的容许误差时,应当提取测定样品用

原定方法重新测定.如果第一次和第二次的测定结果一致,即两次测定结果之差不超过表7规定的最大容许差距,则以两次测定的平均数作为测定结果填报。如果两次测定结果不一致,即它们的差异超过表7规定的最大容许差距,应当仍用同样的测定方法布置第三次测定。以三次测定中相互一致的两次的平均数作为测定结果填报。

表7 重新发芽测定容许差距

两次测定的发芽平均数 最大容许误差 两次测定的发芽平均数 最大容许误差
1 2 3 1 2 3
98~99
95~97
91~94
85~90
2~3
4~6
7~10
11~16
2
3
4
5
77~84
60~76
51~59
17~24
25~41
42~50
6
7
8